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在分子生物學研究中，樣品定量是評估核酸和蛋白質(zhì)提取物是否適合后續(xù)應用（如分子克隆、高通量測序或PCR）的關(guān)鍵步驟。核酸分析主要使用兩種定量技術(shù)：紫外-可見光分光光度法和熒光定量法。然而，使用者在兩者之間選擇時可能面臨困難。本指南將簡要說明這兩種技術(shù)的功能和應用，以幫助您選擇合適的工具。

分光光度計長期以來被應用于核酸定量，提供多種適用性廣泛的方法。其操作基于光吸收的基本原理。分光光度計可測量樣品在特定波長下吸收的光量，以測定吸光度，此參數(shù)與吸收物質(zhì)的濃度成正比。這原理源自比爾-朗伯定律，為測定溶液中物質(zhì)濃度提供了強大的工具。

在核酸定量方面，分光光度計特別適合評估核酸純度。核酸在260nm波長處有特征吸收峰，使此波長成為分光光度分析的常用參考點。然而，需要注意的是，這種方法缺乏對核酸的選擇性，因為DNA和RNA都在260nm處吸收光。這意味著分光光度法無法區(qū)分純DNA和受RNA污染的樣品，或任何在相同波長吸收的其他物質(zhì)。

◆ 熒光定量法：針對高要求應用提供更高的靈敏度和特異性

作為一種互補策略，熒光法在核酸定量方面提供了更高的靈敏度和區(qū)分不同核酸類型的能力。該技術(shù)使用特定的熒光染料。這些染料特異性地與核酸分子結(jié)合，并在外部光源激發(fā)下發(fā)出特定波長的光。通過測量這種發(fā)射光（熒光）的強度，即使在極低濃度下，也能準確地定量核酸濃度。

相較于分光光度計，熒光計具有多項優(yōu)勢。首先，它能夠區(qū)分不同類型的核酸，如單鏈DNA (ssDNA)或雙鏈DNA(dsDNA)，在樣品組成至關(guān)重要的應用中具有特別的價值。此外，熒光計可以檢測皮克(pg)級別的核酸濃度，遠遠超過分光光度計的納克(ng)范圍。

◆ 選擇合適的儀器：考慮樣品特性

在核酸定量中選擇分光光度計或熒光計，最終取決于樣品特性和后續(xù)實驗的具體要求。對于納克級范圍內(nèi)的純均質(zhì)核酸樣品，或不需要區(qū)分核酸類型時，分光光度計提供了簡單且經(jīng)濟實惠的解決方案。

反之，熒光計適用于低濃度樣品（皮克等級）、異質(zhì)性（成分復雜），以及需要區(qū)分核酸類型的分析。熒光計提供更高的靈敏度和特異性，但使用熒光染料的步驟較為繁瑣，所需時間也較長。此外，熒光計的前期相關(guān)配置采購成本通常高于分光光度計。

選擇分光光度計和熒光計的比較

◆ 兩種檢測技術(shù)的完美結(jié)合

雖然紫外-可見光分光光度法和熒光定量法有顯著差異，EzDrop分光光度計和EzCube熒光計提供了截然不同卻又互補的樣品定量方法。

EzDrop分光光度計：此儀器能快速準確地基于吸光度的純化樣品定量，包括核酸和蛋白質(zhì)。其檢測范圍廣泛，dsDNA 濃度從2到20,000ng/μL，蛋白質(zhì)濃度（如 BSA）從0.06到600mg/mL。

EzDrop1000C超微量／比色管分光光度計

EzCube熒光計：此儀器擅長識別特定類型的核酸，包括ssDNA、dsDNA和 RNA。使用針對不同樣品類型的特定配對試劑，其dsDNA的低檢測限可達dsDNA 0.01ng/μL (10pg/μL)、ssDNA為0.05ng/μL(50pg/μL)，RNA則為0.25ng/μL (250pg/μL)。此外，EzCube熒光計具有三個LED光源，可激發(fā)各種熒光試劑，使其能夠應用于NGS、qPCR、克隆和轉(zhuǎn)染等特定應用。

EzCube熒光計

選擇適合您需求的 EzDrop 分光光度計和 EzCube 熒光計

◆ 結(jié)論：善用互補優(yōu)勢

EzDrop分光光度計和EzCube熒光計提供截然不同卻又互補的定量方法。EzDrop分光光度計可以進行快速準確的吸光度定量，而EzCube熒光計則擅長以低檢測限識別特定核酸類型。通過善用它們的互補優(yōu)勢，研究人員可以有效地定量各種樣品并識別具有不同特性的樣品，最終促進后續(xù)實驗的成功。